জেনেটিক অধ্যয়ন পরিচালনার প্রক্রিয়ায়, আমরা প্রায়শই অপর্যাপ্ত RNA নমুনার সম্মুখীন হই, উদাহরণস্বরূপ, ক্ষুদ্র শারীরবৃত্তীয় মৌখিক টিউমার, এমনকি একক কোষের নমুনা এবং নির্দিষ্ট জিন মিউটেশনের নমুনা অধ্যয়নের জন্য যা মানব কোষে খুব নিম্ন স্তরে প্রতিলিপি করা হয়।অবশ্যই, COVID-19 পরীক্ষার জন্য, যদি স্যাম্পগুলি সঠিক জায়গায় না থাকে বা নমুনা নেওয়ার সময় পর্যাপ্ত সময় না থাকে, তাহলে নমুনার আকার খুব কম হবে, যে কারণে স্বাস্থ্য ও পরিবার পরিকল্পনা কমিশন দু'দিন আগে প্রকাশ করেছিল এবং পরীক্ষায় উত্তীর্ণ হয়েছে, এবং যদি নিউক্লিক অ্যাসিড স্যাম্পলার ছয়টি নমুনা না নেয়, আপনি এটি রিপোর্ট করতে পারেন।
রিএজেন্টের সংবেদনশীলতা গুরুত্বপূর্ণ কারণ আমাদের এই সমস্যা বা সেই সমস্যা আছে, তাই আরটি-পিসিআর-এর সংবেদনশীলতা উন্নত করতে আমরা কী করতে পারি?
সম্ভাব্য সমাধান নিয়ে আলোচনা করার আগে, আমরা এইমাত্র যে পরিস্থিতির কথা উল্লেখ করেছি তার সাথে দুটি বড় জটিলতার উল্লেখ করা যাক।
প্রথমত, যখন আমাদের নমুনায় মাত্র কয়েকটি কোষের জনসংখ্যা থাকে তখন আমরা আরএনএ ক্ষতির বিষয়ে উদ্বিগ্ন হই।যদি ঐতিহ্যগত পৃথকীকরণ এবং পরিষ্কারের পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়, যেমন কলাম পদ্ধতি বা নিউক্লিক অ্যাসিড বৃষ্টিপাত পদ্ধতি, তবে কয়েকটি নমুনা হারিয়ে যাওয়ার একটি উচ্চ সম্ভাবনা রয়েছে।একটি সমাধান হল একটি বাহক অণু যোগ করা, যেমন tRNA, কিন্তু তারপরও, আমাদের পুনরুদ্ধার পরীক্ষা ঠিক আছে এমন কোন গ্যারান্টি নেই।
তাই একটি ভাল উপায় কি?সংস্কৃত কোষ বা মাইক্রোঅ্যানটমিক্যাল নমুনাগুলির জন্য একটি ভাল বিকল্প হল সরাসরি লাইসিস ব্যবহার করা।
ধারণাটি হল 5 মিনিটের জন্য কোষগুলিকে বিভক্ত করা, আরএনএকে দ্রবণে ছেড়ে দেওয়া, তারপরে 2 মিনিটের জন্য প্রতিক্রিয়া বন্ধ করা, তারপরে লাইসেটকে সরাসরি বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন বিক্রিয়াতে যুক্ত করা যাতে কোনও আরএনএ হারিয়ে না যায় এবং অবশেষে ফলস্বরূপ সিডিএনএ সরাসরি স্থাপন করা হয়। রিয়েল-টাইম প্রতিক্রিয়া মধ্যে.
কিন্তু যদি, একটি সীমিত প্রারম্ভিক বিন্দু বা অল্প পরিমাণে টার্গেট জিনের অভিব্যক্তির কারণে, আমরা সমস্ত আরএনএ পুনর্ব্যবহার করতে পারি এবং এখনও একটি ভাল রিয়েল-টাইম সংকেত পাওয়ার জন্য পর্যাপ্ত টেমপ্লেট সরবরাহ করতে পারি না?
এই ক্ষেত্রে, প্রি-এম্প্লিফিকেশন পদক্ষেপ খুব দরকারী হতে পারে।
রিভার্স ট্রান্সক্রিপশনের পরে সংবেদনশীলতা বাড়ানোর জন্য নিম্নলিখিত একটি স্কিম রয়েছে।শুরু করার আগে, আমাদেরকে নিচের দিকে জিজ্ঞাসা করতে হবে যে আমরা কোন লক্ষ্যগুলিতে আগ্রহী, যাতে প্রাক-বিবর্ধনের জন্য এই লক্ষ্যগুলির জন্য নির্দিষ্ট প্রাইমার ডিজাইন করা যায়।
এটি 100 জোড়া প্রাইমার এবং 10 থেকে 14 বার প্রতিক্রিয়া চক্রের সাথে একটি মিশ্র প্রাইমার তৈরি করে অর্জন করা যেতে পারে।অতএব, এই প্রয়োজনীয়তার জন্য বিশেষভাবে ডিজাইন করা একটি মাস্টার মিক্স প্রাপ্ত সিডিএনএকে প্রাক-বর্ধিত করার জন্য প্রয়োজন।
10 এবং 14 এর মধ্যে চক্রের সংখ্যা নির্ধারণের কারণ হল এই সীমিত সংখ্যক চক্র বিভিন্ন লক্ষ্যগুলির মধ্যে এলোমেলোতা নিশ্চিত করে, যা গবেষকদের জন্য অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ যাদের পরিমাণগত আণবিক তথ্য প্রয়োজন।
প্রাক-পরিবর্ধনের পরে, আমরা প্রচুর পরিমাণে cDNA পেতে পারি, যাতে পিছনের প্রান্তে সনাক্তকরণের সংবেদনশীলতা ব্যাপকভাবে উন্নত হয়, এবং আমরা এমনকি নমুনাটি পাতলা করতে পারি এবং সম্ভাব্য এলোমেলো ত্রুটিগুলি দূর করতে একাধিক রিয়েল-টাইম পিসিআর প্রতিক্রিয়া সম্পাদন করতে পারি।
পোস্টের সময়: এপ্রিল-১১-২০২৩